肌苷致急性高尿酸血癥小鼠模型

該模型通過長期觀察普通狼瘡小鼠模型，待其到40周齡時，檢測其dsDNA等，結(jié)合皮膚癥狀變化，來確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立。目前國際上尚欠缺類似模型，為研究狼瘡皮膚病發(fā)病機(jī)制提供了工具。

模型動物飼養(yǎng)在武漢大學(xué)人民醫(yī)院動物房SPF級動物實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)動物使用許可證SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特點(diǎn)

門采用專用凈化密閉門并配備觀察窗。單向走道呈順時針走向設(shè)計。屏障系統(tǒng)內(nèi)共有大鼠飼養(yǎng)室1間，小鼠飼養(yǎng)室3間，隔離觀察室1間，實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備室1間，潔物存放室1間，清洗消毒室1間。此外，屏障系統(tǒng)外配有監(jiān)控室、機(jī)房和配電室等。

（2）設(shè)計參數(shù)

室內(nèi)溫度：20～26°C；日溫差：≤4°C；相對濕度：40%～70%；換氣次數(shù)：15～20次/h；氣流速度：≤0．2m/s；壓強(qiáng)梯度：20～50Pa；空氣潔凈度：7級；菌落數(shù)：≤3個/皿；氨濃度：≤14mg/m3；噪聲：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；動物照度：15～20lx；晝夜明暗交替時間：12/12h。

（3）通風(fēng)和空調(diào)系統(tǒng)

動物實(shí)驗(yàn)室采用全新風(fēng)中央空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)?？諝饨?jīng)過初、中、三級過濾器后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室內(nèi)環(huán)境。

（4）照明系統(tǒng)

一更、淋浴、二更、氣閘、清潔走道、潔物存放處、污物走道、緩沖間和清洗消毒間、動物飼養(yǎng)室、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備間、隔離觀察室和功能實(shí)驗(yàn)室等安裝有手動和自動開關(guān)，根據(jù)實(shí)際需要，調(diào)節(jié)控制室內(nèi)照明燈。未啟用房間、清潔走道、潔物存放處、污物走道等在每日中午12點(diǎn)和晚上8點(diǎn)開啟紫外線燈照射1h。

（5）通訊系統(tǒng)

因?yàn)镾PF級動物實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境和設(shè)施具有特殊要求，人員進(jìn)入后不能隨意出入，而室內(nèi)外的聯(lián)系又十分重要，故室內(nèi)各房間均安裝內(nèi)部電話機(jī)，按照房間順序編排電話號碼，各室內(nèi)電話可相互連通，并均與監(jiān)控室總機(jī)保持聯(lián)系，保證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外信息的及時溝通。

（6）監(jiān)控系統(tǒng)

對SPF級動物實(shí)驗(yàn)室的出入口、走道、實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)室、功能操作室等重要位置均安裝了可作270°旋轉(zhuǎn)的攝像機(jī)，能夠及時了解設(shè)施的運(yùn)行狀態(tài)；也能有效督促實(shí)驗(yàn)人員執(zhí)行科學(xué)的操作規(guī)程，避免人為因素造成室內(nèi)環(huán)境和設(shè)施的污染；并對整個實(shí)驗(yàn)期間的動物狀態(tài)和反應(yīng)進(jìn)行觀察，減少對動物的滋擾。

（7）供水系統(tǒng)

SPF級實(shí)驗(yàn)動物飲用水以純凈水為宜。本實(shí)驗(yàn)室采用管道供水，將處理后的純凈水用塑膠管道輸送到屏障系統(tǒng)內(nèi)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備室，設(shè)置接水槽，為實(shí)驗(yàn)動物供應(yīng)滅菌的飲用水和屏障系統(tǒng)內(nèi)用水。要經(jīng)常更換和清洗輸水管道，清洗籠具的用水添加適當(dāng)比例的84消毒液。

（8）供電系統(tǒng)、警報系統(tǒng)和消防設(shè)施

SPF級動物實(shí)驗(yàn)室要求全天候不間斷供風(fēng)和供電，如果出現(xiàn)故障，不能及時發(fā)現(xiàn)和處理，就可能導(dǎo)致環(huán)境設(shè)施的污染、動物感染或死亡，造成嚴(yán)重后果。因此應(yīng)對SPF級動物實(shí)驗(yàn)室使用獨(dú)立穩(wěn)定的供電系統(tǒng)，并配備有應(yīng)急電源。在中央空調(diào)機(jī)房控制室安裝風(fēng)機(jī)故障警報系統(tǒng)，以便及時檢修和維護(hù)，保證設(shè)施的安全運(yùn)行。

（9）消毒滅菌設(shè)備

為防止外界物品進(jìn)入SPF級動物實(shí)驗(yàn)室時所攜帶的細(xì)菌污染室內(nèi)環(huán)境和造成動物交叉感染，按照不同物品的特性，進(jìn)行紫外線照射消毒、渡槽消毒液消毒或?qū)Ｓ玫臋C(jī)動門真空滅菌器消毒。

（10）動物飼養(yǎng)籠具

飼養(yǎng)大、小鼠的籠具聚碳酸脂材料的塑膠籠具，具有高透明、耐高壓、耐高溫、耐酸堿等特點(diǎn)。通用的不銹鋼籠具長、寬、高分別為40、30、20cm，適用于單籠飼養(yǎng)有特殊要求的實(shí)驗(yàn)動物，配有底盤和食槽，確保實(shí)驗(yàn)動物有充足的采食和活動空間，同時也保證室內(nèi)環(huán)境的清潔。

（11）墊料的選擇和使用

在使用塑膠墊料時，墊料是大小鼠直接接觸的鋪墊物，起到吸濕、保暖和造窩的作用。墊料的好壞直接影響到大小鼠術(shù)后的恢復(fù)、生長發(fā)育和繁殖性能。目前，所使用的墊料主要有玉米秸墊料、刨花墊料。

（12）飼料配制

大小鼠的生產(chǎn)型飼料和維持型飼料必須嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行科學(xué)配制生產(chǎn)。每半年檢測一次飼料的微生物指標(biāo)和有效營養(yǎng)成分指標(biāo)，保證飼料的質(zhì)量。

（1） 尿酸水平檢測

結(jié)果顯示:小鼠100mg/kg、400mg/kg、500mg/kg.600mg/kg劑量組與對照組對比尿酸值在0.5h均有升高。小鼠100mg/kg劑量組與對照組對比尿酸值有升高,但升幅不大，400mg/kg、500mg/kg劑量組在0.5h血尿酸濃度大于尿酸在血中的結(jié)晶濃度416.5umol/L,Ih開始下降,4h血清尿酸值恢復(fù)致平均水平,0.5h血尿酸濃度與對照組對比尿酸值差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P<0.01;600mg/kg劑量組與正常組對比尿酸值在0.5h,Ih有升高,但升幅未能達(dá)到不到尿酸在血中的結(jié)晶濃度(417umo1/L),2h開始下降。綜上所述,致使小鼠高尿酸血癥肌苷的最佳劑量為400mg/kg和500mg/kg,其中400mg/kg劑量就可行成穩(wěn)定的急性高尿酸血癥。結(jié)果為表1,圖1。表型信息

SPF級ICR小鼠100只,雌雄各半,體重22-25g。

1. 誘導(dǎo)劑準(zhǔn)備

肌苷(Inosine)：Inosine,Sigma公司,批號:Lot#SLBP5740V,生理鹽水溶解。給藥途徑:腹腔注射。

尿酸(UA)測定試劑盒,南京建成生物工程研究所產(chǎn)品,批號:20170502

2. 實(shí)驗(yàn)動物

SPF級ICR小鼠100只,雌雄各半,體重22-25g。

3. 給藥

選取22--25g小鼠40只,雌雄各半,隨機(jī)分為5組,每組8只,按下列劑量腹腔注射肌苷,劑量分別為:100mg/kg、400mg/kg.500mg/kg.600mg/kg,對照組為等體積的生理鹽水。用藥后于0h、0.5h、1h、2h、4h.8h尾靜脈采血0.5ml,分離血清。

高尿酸血癥是由各種因素引起的尿酸產(chǎn)生過多、或腎臟排出尿酸減少、或兩者兼有，致使血液中尿酸鹽超過正常水平（6 毫克/100 毫升）的病理狀態(tài)。高尿酸血癥是痛風(fēng)最重要的生化基礎(chǔ)，并且與心血管疾病、免疫系統(tǒng)紊亂等密切相關(guān)，嚴(yán)重危害人類健康。目前臨床上用于治療高尿酸血癥的藥物以抑制尿酸生成和促進(jìn)尿酸排泄為主。隨著分子生物技術(shù)的快速發(fā)展和人們對高尿酸血癥發(fā)病機(jī)制和遺傳學(xué)認(rèn)識的日益加深，新的治療靶點(diǎn)不斷被發(fā)現(xiàn)，新型治療藥物也相繼問世。尋找更加合理、科學(xué)的藥效學(xué)評價動物模型迫在眉睫。

尿酸是人體嘌呤代謝的終產(chǎn)物,主要有肝臟代謝產(chǎn)生,腎臟排泄出體外。高尿酸血癥(hyperuricemia,HUA)是血液中由于肝臟代謝產(chǎn)生尿酸過多或腎臟排泄尿酸減少,或者兩者兼有的原因產(chǎn)生血液中尿酸水平增高,甚至高于血尿酸產(chǎn)生結(jié)晶的飽和濃度(7.0mg/dl,相當(dāng)于416.5umol/L)是的病理狀態(tài)。近年來,隨著人民生活水平的提高,飲食結(jié)構(gòu)和生活習(xí)慣的改變,高尿酸血癥的患病率逐年增高,流行病學(xué)研究資料表明高尿酸血癥和原發(fā)性痛風(fēng)的發(fā)病呈上升趨勢,在中國,已經(jīng)有1.2億的HUA人群,大約占總?cè)丝诘?0%,中老年及絕經(jīng)后的婦女為高發(fā)人群,近年來發(fā)病年齡也呈年輕化的趨勢。高尿酸血癥與肥胖、高血壓、高脂血癥、冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、胰島素抵抗的發(fā)生密切相關(guān),已成為識別代謝綜合征的早期標(biāo)志,這使人們對高尿酸血癥產(chǎn)生了更多關(guān)注，并重新審視一些疾病的危險因素和防治策略,治療和控制高尿酸血癥己成為代謝性疾病治療的重要組成部分。動物模型是研究疾病發(fā)病機(jī)理,尋找新型治療藥物的重要工具。目前國內(nèi)外高尿酸血癥動物模型復(fù)制方法多樣,主要造模方法有補(bǔ)充尿酸前體物質(zhì)次黃嘌呤、補(bǔ)充外源性尿酸,使用氧嗪酸鉀(potassiumoxonate)抑制尿酸酶活性、腺嘌呤抑制尿酸排泄。其中應(yīng)用較為成熟穩(wěn)定且常用的造模方法通過氧嗪酸抑制尿酸酶活性導(dǎo)致血清尿酸值升高。但現(xiàn)有的動物模型在穩(wěn)定性和代謝途徑方面均存在一-定的不足,因而限制了治療高尿酸d血u癥藥物的發(fā)展及高尿酸血癥致病機(jī)制研究探索建立更合乎人類發(fā)病機(jī)制、與人體尿酸代謝異常相似的動物模型仍是目前高尿酸模型研究中值得不斷探索和努力的課題。