肌苷致急性高尿酸血癥樹鼩模型

該模型通過長(zhǎng)期觀察普通狼瘡小鼠模型，待其到40周齡時(shí)，檢測(cè)其dsDNA等，結(jié)合皮膚癥狀變化，來確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立。目前國(guó)際上尚欠缺類似模型，為研究狼瘡皮膚病發(fā)病機(jī)制提供了工具。

模型動(dòng)物飼養(yǎng)在武漢大學(xué)人民醫(yī)院動(dòng)物房SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特點(diǎn)

門采用專用凈化密閉門并配備觀察窗。單向走道呈順時(shí)針走向設(shè)計(jì)。屏障系統(tǒng)內(nèi)共有大鼠飼養(yǎng)室1間，小鼠飼養(yǎng)室3間，隔離觀察室1間，實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備室1間，潔物存放室1間，清洗消毒室1間。此外，屏障系統(tǒng)外配有監(jiān)控室、機(jī)房和配電室等。

（2）設(shè)計(jì)參數(shù)

室內(nèi)溫度：20～26°C；日溫差：≤4°C；相對(duì)濕度：40%～70%；換氣次數(shù)：15～20次/h；氣流速度：≤0．2m/s；壓強(qiáng)梯度：20～50Pa；空氣潔凈度：7級(jí)；菌落數(shù)：≤3個(gè)/皿；氨濃度：≤14mg/m3；噪聲：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；動(dòng)物照度：15～20lx；晝夜明暗交替時(shí)間：12/12h。

（3）通風(fēng)和空調(diào)系統(tǒng)

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室采用全新風(fēng)中央空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)。空氣經(jīng)過初、中、三級(jí)過濾器后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室內(nèi)環(huán)境。

（4）照明系統(tǒng)

一更、淋浴、二更、氣閘、清潔走道、潔物存放處、污物走道、緩沖間和清洗消毒間、動(dòng)物飼養(yǎng)室、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備間、隔離觀察室和功能實(shí)驗(yàn)室等安裝有手動(dòng)和自動(dòng)開關(guān)，根據(jù)實(shí)際需要，調(diào)節(jié)控制室內(nèi)照明燈。未啟用房間、清潔走道、潔物存放處、污物走道等在每日中午12點(diǎn)和晚上8點(diǎn)開啟紫外線燈照射1h。

（5）通訊系統(tǒng)

因?yàn)镾PF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境和設(shè)施具有特殊要求，人員進(jìn)入后不能隨意出入，而室內(nèi)外的聯(lián)系又十分重要，故室內(nèi)各房間均安裝內(nèi)部電話機(jī)，按照房間順序編排電話號(hào)碼，各室內(nèi)電話可相互連通，并均與監(jiān)控室總機(jī)保持聯(lián)系，保證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外信息的及時(shí)溝通。

（6）監(jiān)控系統(tǒng)

對(duì)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的出入口、走道、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)室、功能操作室等重要位置均安裝了可作270°旋轉(zhuǎn)的攝像機(jī)，能夠及時(shí)了解設(shè)施的運(yùn)行狀態(tài)；也能有效督促實(shí)驗(yàn)人員執(zhí)行科學(xué)的操作規(guī)程，避免人為因素造成室內(nèi)環(huán)境和設(shè)施的污染；并對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間的動(dòng)物狀態(tài)和反應(yīng)進(jìn)行觀察，減少對(duì)動(dòng)物的滋擾。

（7）供水系統(tǒng)

SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲用水以純凈水為宜。本實(shí)驗(yàn)室采用管道供水，將處理后的純凈水用塑膠管道輸送到屏障系統(tǒng)內(nèi)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備室，設(shè)置接水槽，為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)滅菌的飲用水和屏障系統(tǒng)內(nèi)用水。要經(jīng)常更換和清洗輸水管道，清洗籠具的用水添加適當(dāng)比例的84消毒液。

（8）供電系統(tǒng)、警報(bào)系統(tǒng)和消防設(shè)施

SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室要求全天候不間斷供風(fēng)和供電，如果出現(xiàn)故障，不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理，就可能導(dǎo)致環(huán)境設(shè)施的污染、動(dòng)物感染或死亡，造成嚴(yán)重后果。因此應(yīng)對(duì)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室使用獨(dú)立穩(wěn)定的供電系統(tǒng)，并配備有應(yīng)急電源。在中央空調(diào)機(jī)房控制室安裝風(fēng)機(jī)故障警報(bào)系統(tǒng)，以便及時(shí)檢修和維護(hù)，保證設(shè)施的安全運(yùn)行。

（9）消毒滅菌設(shè)備

為防止外界物品進(jìn)入SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室時(shí)所攜帶的細(xì)菌污染室內(nèi)環(huán)境和造成動(dòng)物交叉感染，按照不同物品的特性，進(jìn)行紫外線照射消毒、渡槽消毒液消毒或?qū)Ｓ玫臋C(jī)動(dòng)門真空滅菌器消毒。

（10）動(dòng)物飼養(yǎng)籠具

飼養(yǎng)大、小鼠的籠具聚碳酸脂材料的塑膠籠具，具有高透明、耐高壓、耐高溫、耐酸堿等特點(diǎn)。通用的不銹鋼籠具長(zhǎng)、寬、高分別為40、30、20cm，適用于單籠飼養(yǎng)有特殊要求的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，配有底盤和食槽，確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有充足的采食和活動(dòng)空間，同時(shí)也保證室內(nèi)環(huán)境的清潔。

（11）墊料的選擇和使用

在使用塑膠墊料時(shí)，墊料是大小鼠直接接觸的鋪墊物，起到吸濕、保暖和造窩的作用。墊料的好壞直接影響到大小鼠術(shù)后的恢復(fù)、生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖性能。目前，所使用的墊料主要有玉米秸墊料、刨花墊料。

（12）飼料配制

大小鼠的生產(chǎn)型飼料和維持型飼料必須嚴(yán)格按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行科學(xué)配制生產(chǎn)。每半年檢測(cè)一次飼料的微生物指標(biāo)和有效營(yíng)養(yǎng)成分指標(biāo)，保證飼料的質(zhì)量。

（1） 尿酸水平檢測(cè)

給藥后0h、0.5h、1h、2h、4h、8h尾靜脈采血0.5ml于1.5ml EP管中，置于4℃冰箱放置1h，4℃、13000r離心15min，分離獲得血清，磷鎢酸法測(cè)定血清尿酸值，按照尿酸（UA）測(cè)定試劑盒說明書所描述的方法檢測(cè)血清尿酸值。

五．表型信息

樹鼩腹腔注射肌苷劑量300mg/kg和400mg/kg在給藥后0.5h、1小時(shí)能使樹鼩血清尿酸值升高，大于尿酸在血中的結(jié)晶濃度（416.5 μmol/L），2小時(shí)后血清尿酸值回落，300mg/kg和400mg/kg用藥組與對(duì)照組在0.5h、1小時(shí)相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（**P﹤0.01）；200mg/kg、250mg/kg劑量組與對(duì)照組對(duì)比尿酸值在升高不明顯，與對(duì)照組在0.5h、1小時(shí)相比均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。綜上所述，致使樹鼩高尿酸血癥肌苷的最佳劑量為300mg/kg～400mg/kg，該劑量組可形成穩(wěn)定的急性高尿酸血癥。結(jié)果見表1和圖1。

1. 誘導(dǎo)劑準(zhǔn)備

肌苷(Inosine)：Inosine,Sigma公司,批號(hào):Lot#SLBP5740V,生理鹽水溶解。給藥途徑:腹腔注射。

尿酸(UA)測(cè)定試劑盒,南京建成生物工程研究所產(chǎn)品,批號(hào):20170502

2. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

中緬樹鼩，滇西亞種樹鼩，雌雄各半，80只，體重均在110g~150g范圍內(nèi)，年齡1-3歲，成年健康，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所提供，常規(guī)性飼養(yǎng)。飼養(yǎng)環(huán)境溫度20℃～25℃，濕度40%～70%，自由飲水和采食。常規(guī)統(tǒng)一蒸糕飼料飼喂。

3. 給藥

肌苷，Inosine，Sigma公司，批號(hào)：Lot #SLBP5740V，給藥途徑：腹腔注射。腹腔注射肌苷200mg/kg、250mg/kg、300mg/kg、400mg/kg，腹腔注射生理鹽水作為對(duì)照。

尿酸是人體嘌呤代謝的終產(chǎn)物，主要有肝臟代謝產(chǎn)生，腎臟排泄出體外。高尿酸血癥（hyperuricemia，HUA）是血液中由于肝臟代謝產(chǎn)生尿酸過多或腎臟排泄尿酸減少，或者兩者兼有的原因產(chǎn)生血液中尿酸水平增高，甚至高于血尿酸產(chǎn)生結(jié)晶的飽和濃度（>7.0mg/dl，相當(dāng)于416.5μmol/L）的病理狀態(tài)。近年來，隨著人民生活水平的提高，飲食結(jié)構(gòu)和生活習(xí)慣的改變，高尿酸血癥的患病率逐年增高，流行病學(xué)研究資料表明高尿酸血癥和原發(fā)性痛風(fēng)的發(fā)病呈上升趨勢(shì)，在中國(guó)，已經(jīng)有1.2億的HUA人群，大約占總?cè)丝诘?0%，中老年及絕經(jīng)后的婦女為高發(fā)人群，近年來發(fā)病年齡也呈年輕化的趨勢(shì)。高尿酸血癥與肥胖、高血壓、高脂血癥、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病、胰島素抵抗的發(fā)生密切相關(guān)，已成為識(shí)別代謝綜合征的早期標(biāo)志，這使人們對(duì)高尿酸血癥產(chǎn)生了更多關(guān)注，并重新審視一些疾病的危險(xiǎn)因素和防治策略，治療和控制高尿酸血癥已成為代謝性疾病治療的重要組成部分。動(dòng)物模型是研究疾病發(fā)病機(jī)理，尋找新型治療藥物的重要工具。

隨著人們對(duì)高尿酸血癥發(fā)病機(jī)制認(rèn)識(shí)的日益加深，新的治療靶點(diǎn)不斷被發(fā)現(xiàn)，新型治療藥物也相繼問世。尋找更加合理、科學(xué)的藥效學(xué)評(píng)價(jià)動(dòng)物模型迫在眉睫。

肌苷(Inosine)，也稱為次黃苷、次黃嘌呤核苷等，是由次黃嘌呤于核糖結(jié)合而成的核苷類化合物，為人體的正常成分，是腺嘌呤的前體，能直接透過細(xì)胞膜進(jìn)入體細(xì)胞，參與體內(nèi)核酸代謝、能量代謝和蛋白質(zhì)的合成。在嘌呤的從頭合成中，肌苷酸(IMP)可以作為合成腺苷酸(AMP)和鳥苷酸(GMP)的前體，Inosine是體內(nèi)ATP、輔酶A、核糖核酸及脫氧核糖核酸等生命分子基本組成，在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榧≤账峒叭姿嵯佘眨⒗^而轉(zhuǎn)換為其他多種核苷酸，同時(shí)肌苷也是尿酸合成的底物，肌苷位于尿酸代謝途徑較前位置上。