Pax1點(diǎn)突變外耳畸形小鼠模型

該模型通過埋植雌激素，進(jìn)而建立了皮膚型狼瘡動(dòng)物模型，主要是檢測(cè)其dsDNA，腎臟變化，結(jié)合皮膚癥狀變化，來確定狼瘡皮膚病模型的建立。目前國(guó)際上尚欠缺類似模型，創(chuàng)新點(diǎn)在于該模型可快速建立模型，屬于誘導(dǎo)性狼瘡皮膚病模型，為研究狼瘡皮膚病發(fā)病機(jī)制提供了工具。目前國(guó)際無報(bào)道。

無安全性問題。

經(jīng)基因型鑒定獲得三只點(diǎn)突變雜合子小鼠，其中兩只在1月齡時(shí)可觀察到單側(cè)耳部畸形，隨著年齡的增大，畸形不明顯?，F(xiàn)在繁殖出F1代雜合子也可以觀察到耳部輕度畸形表型，耳廓上部軟骨向下卷曲，近似人類杯狀耳畸形。

SPF級(jí)1-10日齡乳鼠，ICR、C57或Balb/c均可。

設(shè)計(jì)方案如下：

Pax1paired box 1 [Musmusculus(house mouse) ]

Gene ID: 18503

Also known as: un; wt; hbs; Pax-1; hunchback;undulated

Location: 2 G2; 2 72.63 cM

Exon count: 6

Chromosome 2 - NC_000068.7

Homo: exon2:c.C638G:p.S213W

Mus: exon2:c.CT611-612GG:p.S204W

m-PAX1-gRNA up1 5’ TAGGACTGATGGAGCTCACAGA

M-PAX1-gRNA down1 5’ aaactctgtgagctccatcagt

Objective

5’accggctactggctgatggcgtttgtgacaagtacaacgtgccctctgtgagctccatcagtcgcatcctgcgaaataagattggcagcc

mut

5’accggctactggctgatggcgtttgtgacaagtacaacgtgccctGGgtgagctccatcagtcgcatcctgcgaaataagattggcagcc

m-PAX1-oligo

5’GGCTGCCAATCTTATTTCGCAGGATGCGACTGATGGAGCTCACCCAGGGCACGTTGTACTTGTCACAAACGCCATCAGCCAGTAGCCGGT

先天性耳畸形的病因目前還不完全明確，主要包括環(huán)境和遺傳因素等方面。先天性耳畸形主要涉及胚胎發(fā)育期間第一和第二鰓弓的異常，主要表現(xiàn)外耳的先天發(fā)育性結(jié)構(gòu)異常，其嚴(yán)重程度主要表現(xiàn)為從輕度結(jié)構(gòu)異常到完全性耳廓缺失，并且可伴有外耳道狹窄和外耳道閉鎖等一系列先天性外耳異常，輕者耳廓略小于正常， 畸形嚴(yán)重者耳廓全部消失。

PAX基因主要調(diào)控發(fā)育基因的轉(zhuǎn)錄、促進(jìn)細(xì)胞增殖和自我更新、抑制細(xì)胞凋亡、引導(dǎo)細(xì)胞前體的定向遷移和分化等。Pax-Six-Eya-Dach是控制動(dòng)物眼、耳、腦神經(jīng)和肌肉發(fā)生及發(fā)育的關(guān)鍵基因網(wǎng)絡(luò)。PAX3基因是Waardenburg綜合征的致病基因，此類患者也表現(xiàn)出不同程度的顱面部發(fā)育缺陷，研究顯示Pax3通過調(diào)控神經(jīng)嵴細(xì)胞的分化和遷移參與胚胎生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)控。EYA是直接參與胚胎發(fā)育過程中的細(xì)胞增殖、組織分化和器官發(fā)育的重要調(diào)控基因，家系研究顯示EYA4基因突變可導(dǎo)致耳部畸形和耳聾，Eya4基因敲除的斑馬魚表現(xiàn)出耳泡細(xì)胞減少、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育異常等。Six基因是與Eya基因共同參與骨骼肌肉形成調(diào)控的重要基因，Six1缺失的小鼠模型可表現(xiàn)出嚴(yán)重的中耳、外耳和聽神經(jīng)的畸形和缺陷。