Prkra 小耳小鼠動(dòng)物模型

該模型通過(guò)埋植雌激素，進(jìn)而建立了皮膚型狼瘡動(dòng)物模型，主要是檢測(cè)其dsDNA，腎臟變化，結(jié)合皮膚癥狀變化，來(lái)確定狼瘡皮膚病模型的建立。目前國(guó)際上尚欠缺類(lèi)似模型，創(chuàng)新點(diǎn)在于該模型可快速建立模型，屬于誘導(dǎo)性狼瘡皮膚病模型，為研究狼瘡皮膚病發(fā)病機(jī)制提供了工具。目前國(guó)際無(wú)報(bào)道。

無(wú)安全性問(wèn)題。

1. Prkra 小耳小鼠外耳表型

通過(guò)飼養(yǎng)繁育得到5 只有表型的純合型Prkra小耳小鼠,其耳廓結(jié)構(gòu)都非常短小,發(fā)育明顯較其正常同胞耳廓小, 失去正常小鼠耳廓亞結(jié)構(gòu)形態(tài),其耳廓形態(tài)與人先天性小耳畸形比較類(lèi)似,外耳道也比正常同胞窄小,小鼠外耳發(fā)育的差異在2 周齡時(shí)就很明顯。

2. Prkra 小耳小鼠骨骼阿利新藍(lán)染色

選取發(fā)育到40 d 的小耳小鼠和正常小鼠,剝皮處理,放入75%乙醇固定2 周,然后放入阿利新藍(lán)工作液中進(jìn)行軟骨染色2 d(根據(jù)樣品大小調(diào)整染色時(shí)間),再放入茜素紅工作液中染色1 d,放入1. 5%雙氧水溶液中進(jìn)行漂白(肉眼可見(jiàn)色素去除為標(biāo)準(zhǔn)),脫色后依次放入20%、40%、60%、80%的甘油進(jìn)行梯度透明各2 周,最后放入100%純甘油中進(jìn)行保存。

Prkra 小耳純合型突變小鼠骨骼發(fā)育受到明顯影響,體型較正常野生型小,四肢骨發(fā)育基本正常,但較細(xì)短,后肢表現(xiàn)尤為明顯。Prkra 小耳小鼠胸廓、肋骨數(shù)目基本正常,畸形小鼠肋骨發(fā)育較細(xì)小,尾骨發(fā)育較細(xì)短,頭顱發(fā)育略小。

Prkra小耳小鼠(B6.Cg-Prkralear)

1. Prkra小耳小鼠繁殖

小鼠飼養(yǎng)條件是按照普通常規(guī)鼠籠飼養(yǎng),每個(gè)籠不超過(guò)5 只小鼠。繁殖方式:用同窩的1 只雄性和1 只雌性交配獲得雜合小鼠,飼養(yǎng)到可以生育的成年鼠后,然后雜合與雜合再交配,得到?jīng)]有表型的雜合雌、雄小鼠。

2. Prkra 小耳小鼠的基因點(diǎn)突變檢測(cè)

DNA 測(cè)序:設(shè)計(jì)引物進(jìn)行Sanger 法測(cè)序,應(yīng)用試劑盒法裂解鼠尾提取DNA,洗脫出的DNA 于-20 ℃ 保存。通過(guò)引物3 在線平臺(tái)( http:/ /primer3.ut.ee/ )設(shè)計(jì)候選變異引物,Prkra 正向引物為T(mén)TCAGTAGCGAGCCAGCAC,反向引物為ACAAC

TGTCCGCTCTGTCG。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)反應(yīng)體系:金牌Mix(green)27 μl,正向引物1 μl,反向引物1 μl,模板DNA 1 μl。

Prkra 小耳小鼠野生型(上)、雜合型(中)和純合型(下)的測(cè)序峰圖,突變位點(diǎn)為在2 號(hào)染色體76、643、218 bp(GRCm38)上的G 向A 的突變,該突變位點(diǎn)位于第3 外顯子之后

小耳畸形的病因目前還不完全明確，環(huán)境和遺傳因素是目前小耳畸形病因研究的重點(diǎn)。先天性小耳畸形在基因突變致病性研究方面還沒(méi)有闡明小耳畸形胚胎發(fā)育的機(jī)制。小耳畸形主要涉及胚胎發(fā)育期間第一和第二鰓弓的異常，主要表型涉及外耳發(fā)育異常。外耳的耳廓是由第一和第二鰓弓的逐漸融合形成的，在發(fā)育過(guò)程中第一和第二鰓弓之間是相互作用，兩弓之間的凹槽加深，形成外耳道，從胚胎的起源來(lái)分析，外耳的發(fā)育至少在一定程度上是由第一和第二鰓弓通過(guò)后腦的部分區(qū)域來(lái)介導(dǎo)的，后腦是鰓弓的神經(jīng)嵴細(xì)胞的來(lái)源，在后腦的第四段基因突變可以導(dǎo)致外耳的發(fā)育缺陷。

小耳畸形主要是指外耳的先天發(fā)育性結(jié)構(gòu)異常，其嚴(yán)重程度主要表現(xiàn)為從輕度結(jié)構(gòu)異常到完全性耳廓缺失，并且可伴有外耳道狹窄和外耳道閉鎖等一系列先天性外耳異常，輕者耳廓略小于正常， 畸形嚴(yán)重者耳廓全部消失， 絕大多數(shù)患者僅遺留花生狀或貝殼狀的殘耳組織。同時(shí)一些小耳畸形患者也常合并顱面部畸形，中耳及半側(cè)顏面骨及軟組織發(fā)育不良等。

Prkra 小耳小鼠屬于自發(fā)性突變,純合型小鼠在2 周齡時(shí)即可見(jiàn)耳廓較小,身長(zhǎng)尺寸比正常稍小。純合型小鼠生長(zhǎng)速度比雜合型或野生型同窩小鼠慢,成熟后不能生育,所以該品系主要靠雜合子與雜合子交配來(lái)繁育,獲得實(shí)驗(yàn)所需的純合型小鼠。Prkra 小耳小鼠突變位點(diǎn)為在2 號(hào)染色體76、643、218 bp(GRCm38)上的G向A 的突變轉(zhuǎn)換,位于第3 外顯子之后,這可能會(huì)影響前體pre-mRNA 的剪接。