氧嗪酸鉀致急性高尿酸血癥小鼠模型

該模型通過長期觀察普通狼瘡小鼠模型，待其到40周齡時，檢測其dsDNA等，結合皮膚癥狀變化，來確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立。目前國際上尚欠缺類似模型，為研究狼瘡皮膚病發病機制提供了工具。

模型動物飼養在武漢大學人民醫院動物房SPF級動物實驗室，實驗動物使用許可證SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特點

門采用專用凈化密閉門并配備觀察窗。單向走道呈順時針走向設計。屏障系統內共有大鼠飼養室1間，小鼠飼養室3間，隔離觀察室1間，實驗準備室1間，潔物存放室1間，清洗消毒室1間。此外，屏障系統外配有監控室、機房和配電室等。

（2）設計參數

室內溫度：20～26°C；日溫差：≤4°C；相對濕度：40%～70%；換氣次數：15～20次/h；氣流速度：≤0．2m/s；壓強梯度：20～50Pa；空氣潔凈度：7級；菌落數：≤3個/皿；氨濃度：≤14mg/m3；噪聲：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；動物照度：15～20lx；晝夜明暗交替時間：12/12h。

（3）通風和空調系統

動物實驗室采用全新風中央空調通風系統。空氣經過初、中、三級過濾器后進入實驗室內環境。

（4）照明系統

一更、淋浴、二更、氣閘、清潔走道、潔物存放處、污物走道、緩沖間和清洗消毒間、動物飼養室、實驗準備間、隔離觀察室和功能實驗室等安裝有手動和自動開關，根據實際需要，調節控制室內照明燈。未啟用房間、清潔走道、潔物存放處、污物走道等在每日中午12點和晚上8點開啟紫外線燈照射1h。

（5）通訊系統

因為SPF級動物實驗室的環境和設施具有特殊要求，人員進入后不能隨意出入，而室內外的聯系又十分重要，故室內各房間均安裝內部電話機，按照房間順序編排電話號碼，各室內電話可相互連通，并均與監控室總機保持聯系，保證實驗室內外信息的及時溝通。

（6）監控系統

對SPF級動物實驗室的出入口、走道、實驗動物飼養室、功能操作室等重要位置均安裝了可作270°旋轉的攝像機，能夠及時了解設施的運行狀態；也能有效督促實驗人員執行科學的操作規程，避免人為因素造成室內環境和設施的污染；并對整個實驗期間的動物狀態和反應進行觀察，減少對動物的滋擾。

（7）供水系統

SPF級實驗動物飲用水以純凈水為宜。本實驗室采用管道供水，將處理后的純凈水用塑膠管道輸送到屏障系統內實驗準備室，設置接水槽，為實驗動物供應滅菌的飲用水和屏障系統內用水。要經常更換和清洗輸水管道，清洗籠具的用水添加適當比例的84消毒液。

（8）供電系統、警報系統和消防設施

SPF級動物實驗室要求全天候不間斷供風和供電，如果出現故障，不能及時發現和處理，就可能導致環境設施的污染、動物感染或死亡，造成嚴重后果。因此應對SPF級動物實驗室使用獨立穩定的供電系統，并配備有應急電源。在中央空調機房控制室安裝風機故障警報系統，以便及時檢修和維護，保證設施的安全運行。

（9）消毒滅菌設備

為防止外界物品進入SPF級動物實驗室時所攜帶的細菌污染室內環境和造成動物交叉感染，按照不同物品的特性，進行紫外線照射消毒、渡槽消毒液消毒或專用的機動門真空滅菌器消毒。

（10）動物飼養籠具

飼養大、小鼠的籠具聚碳酸脂材料的塑膠籠具，具有高透明、耐高壓、耐高溫、耐酸堿等特點。通用的不銹鋼籠具長、寬、高分別為40、30、20cm，適用于單籠飼養有特殊要求的實驗動物，配有底盤和食槽，確保實驗動物有充足的采食和活動空間，同時也保證室內環境的清潔。

（11）墊料的選擇和使用

在使用塑膠墊料時，墊料是大小鼠直接接觸的鋪墊物，起到吸濕、保暖和造窩的作用。墊料的好壞直接影響到大小鼠術后的恢復、生長發育和繁殖性能。目前，所使用的墊料主要有玉米秸墊料、刨花墊料。

（12）飼料配制

大小鼠的生產型飼料和維持型飼料必須嚴格按照國家標準，進行科學配制生產。每半年檢測一次飼料的微生物指標和有效營養成分指標，保證飼料的質量。

1. 血清尿酸水平變化

給藥后 1h，氧嗪酸鉀各劑量組的血清尿酸值都開始升高，其中 200mg/kg、300mg/kg 以及 600mg/kg 氧嗪酸鉀劑量組與對照組比較顯著增高。造模后 2h 只有 600mg/kg 氧嗪酸鉀劑量組血清尿酸值繼續升高到( 432 ± 34) μmol/L，其它各組血清尿酸值均已下降，600mg/kg 氧嗪酸鉀劑量組血清尿酸值在藥后 4h也開始下降到和正常對照組一般的水平（表1）。

2. 黃嘌呤氧化酶表達變化

小鼠鼠腹腔注射 600mg/kg 劑量的氧嗪酸鉀組，肝臟組織 XDH/XOmＲNA 表達較對照組上調; 同時注射 600mg / kg 劑量氧嗪酸鉀、47． 2mg / kg 和 3mg / kg 劑量的別嘌醇組，肝臟組織 XDH / XOmＲ-NA 表達較模型組 600mg / kg 劑量的氧嗪酸鉀組下調，差異不明顯，注射 47． 2mg/kg 和 Blank 組( 未做任何給藥處理的組) 與1% CMC-Na 組 XDH / XOmＲNA 相當（表2）。

SPF級 ICＲ小鼠160 只，雌雄各半，由中國醫學科學院醫學生物學研究所小動物實驗部提供，屏障系統內飼養。飼養環境溫度 20℃ ～ 25℃ ，濕度40% ～ 70% ，自由飲水和采食。

1. 誘導劑準備

氧嗪酸鉀，Sigma公司產品，純度≥97%。溶于羧甲基纖維素鈉，制備成100mg/kg、200mg/kg、300mg/kg、400mg/kg、500mg / kg 和 600mg / kg 劑量。

2. 實驗動物

SPF級ICＲ小鼠160只，雌雄各半，18~22g,飼養于屏障環境。

3. 給藥

對照組腹腔注射 1%CMC-Na，實驗組給藥方案分別如下: 600mg / kg 劑量氧嗪酸鉀組、47.2mg/kg 劑量別嘌醇組、600mg/kg 氧嗪酸鉀 + 47.2mg/kg別嘌醇組600mg/kg 氧嗪酸鉀 + 6.3mg/kg 別嘌醇組。

4. 模型分析指標

（1） 尿酸水平檢測

給藥后1h、2h、4h、8h 空腹割尾采血 0.4ml于1.5ml EP 管中，置于4℃ 冰箱放置1h，4℃ 、13 000r/min 離心15min，取血清，磷鎢酸法測定尿酸值。

（2） 小鼠肝臟黃嘌呤氧化酶 / 脫氫酶 (XDH / XO) mＲNA表達水平檢測

8小時后處死小鼠，取肝臟，提取RNA，逆轉錄為cDNA,設計引物F:5 ＇-TGATGCAAGCTGGTGGTG-3＇;R:5＇-GCCACTGAGGTCAGTTCAAGGA-3＇實時熒光定量法檢測: 首先將小鼠肝臟 c DNA 以 10為稀釋因子，做 5 個梯度稀釋，然后分別做 XDH/XO 基因及 GAPDH 基因的標準曲線，再根據標準曲線的擴增效率對基因的表達效率進行檢測。具體操作方法如下: 分別加 XDH/XO 基因及 GAPDH 基因上、下游引物各 1μL( 10p) ，再分別加 SYBＲ Premix Ex Taq II ( Tli ＲNase H Plus) 12．5μL 及滅菌去離子水 9． 5μL、c DNA 1μL，總體積 25μL，實時熒光定量 PCＲ 設無模板對照反應條件為: 94℃ 預變性 30s，94℃變性 5s、59℃ 退火 30s、40 個循環，其中 59℃ 到 94℃ 每 5s 采集一次熒光。反應完成后根據熒光信號的數據，使用 CFXManager軟件計算出 XDH/XO mＲNA 表達的差異。

尿酸是嘌呤在人體中代謝的最終產物，主要通過黃嘌呤脫氫酶/氧化酶（XDH / XO）在肝臟中產生，并通過腎臟排泄。高尿酸血癥（HUA）的特征是血液中尿酸水平升高。痛風是一種由于細胞外尿酸鹽過飽和而在關節和其他組織中沉積尿酸鈉鹽晶體而引起的疾病。 HUA定義為血液中飽和的血清尿酸鹽濃度（>7.0 mg / dl，等于416.5 μmol / l）。痛風和HUA在人類中的發病率近來一直在增加。HUA也與高血壓和代謝綜合征的發病機制有關。根據臨床報告，關鍵的病因是尿酸，不僅與痛風的風險增加有關，而且與心血管疾病，腎結石，糖尿病，肥胖和血脂異常的風險增加有關。

黃嘌呤氧化酶主要存在于肝臟和腸道中，可將次黃嘌呤氧化成黃嘌呤，黃嘌呤氧化成尿酸。尿酸是嘌呤代謝的副產物，正常情況下，尿酸由腎臟排泄; 然而，如果由于尿酸過量或腎功能不全而未能通過泌尿系統完全清除，過量的尿酸會結晶沉積在關節和腎臟中，導致痛風的發展，痛風是世界范圍內常見的疾病。由于嚙齒類動物體內有尿酸酶，尿酸酶能夠催化尿酸氧化生成尿囊素、過氧化氫和二氧化碳，所以，對于高尿酸血癥嚙齒類動物模型，抑制尿酸酶活性是造模的關鍵。氧嗪酸鉀是一種競爭性尿酸酶抑制劑，可阻斷肝臟尿酸酶的作用，并在嚙齒類動物中產生尿酸，氧嗪酸鉀是合適的造模用藥。