頸脊髓壓迫大鼠模型

該模型采用了CRISPR/Cas9技術，創新性地結合了人類遺傳學與動物基因編輯技術，首次在小鼠上重構了與人類疾病類似的遺傳模式，在Tbx6基因上同時引入無效突變和promotor區域的亞效等位基因，并將二者結合，形成復合雜合突變并獲得相應的脊柱畸形表型。該模型是國際上首創的復合雜合突變脊柱畸形表型，對于解釋先天性脊柱側凸的分子機制和發病過程具有極高的研究討論價值。

該基因編輯小鼠將在屏障隔離環境（北京協和醫院實驗動物中心）內進行繁育、飼養及相關實驗，其監督管理措施由動物中心負責。屏障隔離期間將保持清潔，保證其具有SPF級別清潔度，減少感染及發病幾率。嚴格實驗室管理，防止小鼠外泄，實驗設計時將禁止其與野生型小鼠交配，保證編輯基因組序列不向自然界流通。上述措施將保證該動物模型的生物安全性，避免其影響生態環境。

1. 動物癥狀觀察

動物在損傷后1個月前后肢可觀察到共濟失調和跛行，繼而出現上肢關節功能障礙和抓握精細功能受損。

2.MRI影像學評估

MRI可見壓迫側脊髓形態改變，面積減少，灰白質萎縮，損傷中心損害較為嚴重并向頭尾側延伸。

3.電生理改變

脊髓壓迫后可出現不同的SEP變化，波形出現明顯改變，可表現為潛伏期延長和波幅降低。

4.病理改變

脊髓壓迫后三個月，HE染色可見脊髓外觀明顯扭曲，神經元數量隨萎縮而減少、組織結構疏松。組織內仍可見少量的出血，中央管擴張，另LFB染色可見壓迫區軸突明顯脫髓鞘改變。

6-8周齡SD大鼠。

1.脊髓壓迫材料的制備

本研究采用吸水膨脹性聚合物脫水吡喃半乳糖基為壓迫材料，材料能吸水溶脹卻又不溶解于水, 且具有良好的組織相容性。聚合物涂有緩釋膜，以控制組織周圍組織的間質液吸收，在24小時內達到最大膨脹，并在6個月內保持最大體積。試驗中干燥狀態的薄片被切割成細條狀, 環氧乙烷消毒后分裝備用。

2.動物模型制作

采用3%戊巴比妥鈉60mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，后俯臥位固定于腦立體定位儀。暴露頸背部, 在C3至C7水平剃毛備皮, 手術行無菌操作。顯露C3至C7椎板, 切除椎板間黃韌帶, 暴露硬脊膜。模型組將薄片聚合物置于大鼠C5-C6的椎板與硬脊膜之間。對照組的硬脊膜暴露及游離操作同模型組, 但不放置壓迫材料。整個手術操作過程動作輕柔, 并注意觀察大鼠的反應以及變化, 盡量避免損傷硬脊膜造成腦脊液漏, 以及避免脊髓急性損傷, 逐層止血縫合。術后均給予青霉素局部滴入預防感染。兩組大鼠術后放置于37℃條件下單籠飼養。如果出現排尿功能障礙, 即實行膀胱部按摩以幫助即實行膀胱部按摩以幫助大鼠排尿, 2次/天直到大鼠恢復自行排尿功能為止。

3.模型分析指標

（1） 行為學觀察

監測大鼠爬行時下肢及軀干運動及協調情況

（2） 影像學評估

術后三個月進行MRI評估

（3） 電生理評估

分別采用SEP和MEP進行神經電生理評估

（4） 組織學觀察

脊髓壓迫后三個月，取材進行石蠟切片HE染色觀察

脊髓型頸椎病是由于椎間盤突出、椎體后緣骨刺、黃韌帶肥厚或鈣化、椎管狹窄等頸椎椎體退化或相鄰軟組織的退變造成脊髓受到壓迫，加之長期保持不良姿勢等原因，使壓迫加重導致脊髓受壓或脊髓缺血，繼而出現脊髓的功能障礙。

臨床表現因病變脊髓被侵襲的程度、部位和范圍而異。感覺障礙多不規律，手臂的麻木多見，但客觀上淺痛覺障礙與病變所支配皮節不一定對應，深感覺少有受累者，可有胸或腹束帶感，此時常伴有腹壁反射增強。

上肢通常多以下運動神經元通路損害為主，手笨拙，無力，表現為寫字、系鞋帶紐扣、用筷子等精細動作困難，隨病情發展可有手內在肌萎縮，可出現上位其他上肢肌力減退。Hoffmann征(霍夫曼征)多顯示陽性，可有反向橈反射，即敲擊肱橈肌腹或肱二頭肌腱致手指快速屈曲，與Hoffmann征陽性意義相同，或出現更早。少數高位脊髓病變可有肌張力增高，腱反射亢進等上運動神經元損害表現。

下肢多為上運動神經元通路異常，表現為肌張力不同程度的增高和肌力減損，膝反射和跟腱反射活躍、亢進，出現踝陣攣、髕陣攣、Babinski征呈陽性。肌張力增高，腱反射亢進導致走路不穩，尤其快走易跌倒、步態蹣跚、可出現痙攣步態。

脊髓型頸椎病較少引起排尿排便困難及括約肌功能障礙。