長期高尿酸血癥慢性腎損傷樹鼩模型

該模型通過長期觀察普通狼瘡小鼠模型，待其到40周齡時，檢測其dsDNA等，結合皮膚癥狀變化，來確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立。目前國際上尚欠缺類似模型，為研究狼瘡皮膚病發病機制提供了工具。

模型動物飼養在武漢大學人民醫院動物房SPF級動物實驗室，實驗動物使用許可證SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特點

門采用專用凈化密閉門并配備觀察窗。單向走道呈順時針走向設計。屏障系統內共有大鼠飼養室1間，小鼠飼養室3間，隔離觀察室1間，實驗準備室1間，潔物存放室1間，清洗消毒室1間。此外，屏障系統外配有監控室、機房和配電室等。

（2）設計參數

室內溫度：20～26°C；日溫差：≤4°C；相對濕度：40%～70%；換氣次數：15～20次/h；氣流速度：≤0．2m/s；壓強梯度：20～50Pa；空氣潔凈度：7級；菌落數：≤3個/皿；氨濃度：≤14mg/m3；噪聲：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；動物照度：15～20lx；晝夜明暗交替時間：12/12h。

（3）通風和空調系統

動物實驗室采用全新風中央空調通風系統。空氣經過初、中、三級過濾器后進入實驗室內環境。

（4）照明系統

一更、淋浴、二更、氣閘、清潔走道、潔物存放處、污物走道、緩沖間和清洗消毒間、動物飼養室、實驗準備間、隔離觀察室和功能實驗室等安裝有手動和自動開關，根據實際需要，調節控制室內照明燈。未啟用房間、清潔走道、潔物存放處、污物走道等在每日中午12點和晚上8點開啟紫外線燈照射1h。

（5）通訊系統

因為SPF級動物實驗室的環境和設施具有特殊要求，人員進入后不能隨意出入，而室內外的聯系又十分重要，故室內各房間均安裝內部電話機，按照房間順序編排電話號碼，各室內電話可相互連通，并均與監控室總機保持聯系，保證實驗室內外信息的及時溝通。

（6）監控系統

對SPF級動物實驗室的出入口、走道、實驗動物飼養室、功能操作室等重要位置均安裝了可作270°旋轉的攝像機，能夠及時了解設施的運行狀態；也能有效督促實驗人員執行科學的操作規程，避免人為因素造成室內環境和設施的污染；并對整個實驗期間的動物狀態和反應進行觀察，減少對動物的滋擾。

（7）供水系統

SPF級實驗動物飲用水以純凈水為宜。本實驗室采用管道供水，將處理后的純凈水用塑膠管道輸送到屏障系統內實驗準備室，設置接水槽，為實驗動物供應滅菌的飲用水和屏障系統內用水。要經常更換和清洗輸水管道，清洗籠具的用水添加適當比例的84消毒液。

（8）供電系統、警報系統和消防設施

SPF級動物實驗室要求全天候不間斷供風和供電，如果出現故障，不能及時發現和處理，就可能導致環境設施的污染、動物感染或死亡，造成嚴重后果。因此應對SPF級動物實驗室使用獨立穩定的供電系統，并配備有應急電源。在中央空調機房控制室安裝風機故障警報系統，以便及時檢修和維護，保證設施的安全運行。

（9）消毒滅菌設備

為防止外界物品進入SPF級動物實驗室時所攜帶的細菌污染室內環境和造成動物交叉感染，按照不同物品的特性，進行紫外線照射消毒、渡槽消毒液消毒或專用的機動門真空滅菌器消毒。

（10）動物飼養籠具

飼養大、小鼠的籠具聚碳酸脂材料的塑膠籠具，具有高透明、耐高壓、耐高溫、耐酸堿等特點。通用的不銹鋼籠具長、寬、高分別為40、30、20cm，適用于單籠飼養有特殊要求的實驗動物，配有底盤和食槽，確保實驗動物有充足的采食和活動空間，同時也保證室內環境的清潔。

（11）墊料的選擇和使用

在使用塑膠墊料時，墊料是大小鼠直接接觸的鋪墊物，起到吸濕、保暖和造窩的作用。墊料的好壞直接影響到大小鼠術后的恢復、生長發育和繁殖性能。目前，所使用的墊料主要有玉米秸墊料、刨花墊料。

（12）飼料配制

大小鼠的生產型飼料和維持型飼料必須嚴格按照國家標準，進行科學配制生產。每半年檢測一次飼料的微生物指標和有效營養成分指標，保證飼料的質量。

1. 血清尿酸水平變化

給經磷鎢酸法試劑盒檢測，樹鼩30天給藥組、120天給藥組ip注射給藥氧嗪酸鉀前后血清尿酸值均見明顯升高，120天給藥組與30天給藥組相比較給藥前后血清尿酸升高趨勢比較接近。

2. 血清肌酐水平變化

經苦味酸比色法肌酐測試盒檢測，樹鼩30天給藥組血清肌酐含量給藥前后血清肌酐含量由73.10±18.71μmol/L變為75.74±7.98μmol/L，幾乎沒有變化（P=0.3565>0.05）無統計學意義,與對照組比較差異幾乎沒有（P>0.05）無統計學意義；120天給藥組給藥前后血清肌酐含量由62.45±14.63μmol/L升高至98.91±17.29μmol/L，（P=0.0443<0.05）有統計學意義，與對照組比較有所升高，（P=0.0049<0.05）有統計學意義。與30天給藥組比較有所升高。結果見表2氧嗪酸鉀致各劑量組血清肌酐變化

3. 低劑量氧嗪酸鉀對樹鼩肝臟、腎臟的病理學影響

用10％甲醛固定的樹鼩肝臟、腎臟由昆明金域醫學檢驗所做病理切片。由病理血診斷報告結果可知120天給藥組腎小球毛細血管擴張、充血（1-5%）。部分腎小管上皮細胞空泡變性（5-10%）、水腫變性（5-10%），腎小管蛋白管 型（1-5%）。腎間質淋巴細胞浸潤（1-5%）。結果見圖1。

4.樹鼩對照組、30天給藥組、120天給藥組肝臟、腎臟、小腸以GAPDH為內參基因LCN2、TGF-β、NF-κB、OAT1、OAT3基因表達水平的實時熒光定量檢測

給藥結束后，提取腎臟、肝臟、小腸RNA，逆轉錄為cDNA,實時熒光定量PCR（Real-timefluorescence quantification，qPCR）檢測LCN2、TGF-β、NF-ΚB、OAT1、OAT3在不同組別的腎臟中mRNA的表達變化，OAT1、OAT3在樹鼩肝臟、小腸mRNA的表達變化。

結果顯示給藥組與對照組比較LCN2、TGF-β、OAT1在腎臟表達上調，OAT3、NF-κB變化不顯著，肝臟的OAT1、OAT3mRNA表達下調，小腸的OAT1、OAT3mRNA表達變化不顯著。本研究探索了LCN2、TGF-β、NF-ΚB、OAT1、OAT3基因的表達變化，為后續研究慢性高尿酸血癥所引起的肝腎損傷的分子機制打下基礎，建立動物模型。

成年滇西亞種樹鼩，18只，雌雄各半，雌性體重范圍為110g~135g，雄性體重范圍為120g~150g。由中國醫學科學院醫學生物學研究所小動物實驗部提供，常規性飼養。飼養環境溫度20℃～25℃，濕度40%～70%，自由飲水和采食。

1. 誘導劑準備

氧嗪酸鉀，Sigma公司產品，純度≥97%。溶于羧甲基纖維素鈉，制備成10mg/kg劑量。

2. 實驗動物

成年滇西亞種樹鼩，18只，雌雄各半，雌性體重范圍為110g~135g，雄性體重范圍為120g~150g。

3. 給藥

將做過空白血清檢測的18只樹鼩隨機分成對照組、30天給藥組，120天給藥組，各6只。雌雄各半，雌性體重均在110g~135g，雄性體重均在120g~150g。對照組每日腹腔注射（iP）1％羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）40mg/kg,給藥時間為120天，給藥組以同樣劑量ip注射氧嗪酸鉀（OA），給藥時間分別為30天和120天。

4. 模型分析指標

（1） 尿酸水平檢測

給藥最后一天空腹給藥1h后，尾靜脈采血0.8ml于1.5mlEP管中，在4℃冰箱存放1h后提取血清，4℃、13000r/min 離心15min，取血清，磷鎢酸法測定尿酸值。

（2） 肌酐水平檢測

給藥最后一天空腹給藥1h后，尾靜脈采血0.8ml于1.5mlEP管中，在4℃冰箱存放1h后提取血清，4℃、13000r/min 離心15min，取血清，苦味酸比色法肌酐測試盒檢測肌酐值。

尿酸是體內嘌呤核苷酸的分解代謝終末產物，嘌呤核苷酸80%由體細胞產生，20%從食物中獲取。尿酸在人體內主要通過腎臟和小腸排出體外。當嘌呤核苷酸類食物攝入過多或者腎臟排泄尿酸的功能降低，將導致血尿酸濃度高于正常范圍，稱為高尿酸血癥(hyperuricem ia.HUA)。而長期高尿酸血癥會通過氧化應激、炎癥反應等途徑引起腎間質纖維化和腎小球硬化，進而導致腎臟發生病理性改變。研究顯示，血尿酸是腎功能異常的獨立危險因素,其對腎功能的影響甚至超過尿蛋白量。隨著血尿酸的升高，發生腎衰竭的概率也會大幅增高。反之，腎臟是體內調控尿酸排泄的重要器官，所以腎損傷又會阻礙尿酸的排泄，使得血尿酸濃度進一步升高，所以高尿酸血癥和腎功能損害是相互作用的，在臨床上表現為痛風性性腎病、急性高尿酸腎病、尿酸結石等。可見研究血尿酸升高導腎損傷的發病因素對于治療腎損傷疾病和高尿酸血癥都至關重要。