乳腺癌細胞4T1綠色熒光記小鼠模型

該小動物模型飼養在清潔級動物中，微生物處于監控狀態，動物房有相應的保護措施，小鼠不會出現逃逸，不會對外界環境造成影響。

本模型將GFP基因轉染到小鼠乳腺癌細胞4T1中得到了高表達GFP細胞株。將GFP標記的小鼠乳腺癌細胞4T1細胞經皮下接種至BALB/C小鼠，用活體熒光成像系統連續觀察，發現7天即可成瘤，并且腫瘤的體積與發光強度有相關性，隨著時間增加，腫瘤逐漸變大，熒光增強（圖1）。和4T1-luc細胞類似，經尾靜脈注射接種腫瘤細胞至BALB/C小鼠，14-21天內可以觀察到肺轉移。

此模型與常規模型相比具有以下優點：1）方法簡單，無創傷性；2）；成瘤率高，死亡率低；3）快速掃描成像(時間少于5 min)；4）可以使實驗動物整體成像；5）可多次重復在不同時間點檢測，同一批實驗動物體內獲得全部時間點的整體數據。

應用 可用于觀察腫瘤疫苗的抗腫瘤活性，為腫瘤免疫治療提供研究工具。

1. 表達載體構建：構建chicken β-actin-GFP-NEO載體。CAG啟動子由巨細胞病毒（thecytomegalovirus，CMV)早期增強子（earlyenhancer element）和雞β-肌動蛋白（chickenbeta-actin）啟動子組成，用于驅動基因在哺乳動物載體的高水平表達。

2. 4T1-eGFP熒光細胞系的獲得：采用脂質體2000轉染小鼠乳腺癌細胞4T1細胞，轉染后24 h，用含有G418的培養液篩選細胞三周，獲得穩定表達GFP的細胞株，選擇其中高表達的克隆株擴大培養。

3. 腫瘤細胞的植入及活體熒光成像：收集處于生長對數期的轉染細胞，稀釋至5×106／mL。取BALB/C小鼠進行皮下接種，1×106個細胞/只。分別在接種的第7、14、21和28天四個時間點觀察腫瘤的生長及轉移情況情況。觀察前每只小鼠腹腔注射飽和三溴乙醇(0.18 mL/10g)麻醉后放入活體熒光影像系統攝像，Slide Book 4.0軟件進行分析。

女性乳腺是由皮膚、纖維組織、乳腺腺體和脂肪組成的，乳腺癌（breast cancer）是發生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤。乳腺癌中99%發生在女性，男性僅占1%。乳腺并不是維持人體生命活動的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌細胞喪失了正常細胞的特性，細胞之間連接松散，容易脫落。癌細胞一旦脫落，游離的癌細胞可以隨血液或淋巴液播散全身，形成轉移，危及生命。目前乳腺癌已成為威脅女性身心健康的常見腫瘤。

早期乳腺癌往往不具備典型的癥狀和體征，不易引起重視，常通過體檢或乳腺癌篩查發現。乳腺腫塊、乳頭溢液、皮膚改變、乳頭、乳暈異常、腋窩淋巴結腫等為乳腺癌的典型體征。

小鼠乳腺癌細胞4T1來自ATCC，是從410.4瘤株中未經誘變篩得的6-硫鳥嘌呤抗性細胞株。當注射到BALB/c 小鼠中時，4T1自發產生高轉移腫瘤，可轉移到肺、肝、淋巴結和大腦，同時在注射部位形成始發灶。誘導轉移時不需要摘除始發灶。4T1細胞在BALB/c小鼠中的生長與轉移特性與人體中的乳腺癌十分相近。

細胞接種動物為BALB/c小鼠，BALB/c 是白色變種實驗室用鼠，起源于小家鼠Mus musculus，廣泛用于免疫學、生理學的動物實驗。