乳腺癌細胞4TO7熒光素酶標記小鼠模型

66c14與4T1和4T07細胞模型比較。將Luc標記的4T1、66c14、4T07細胞對BALB／c小鼠乳腺原位接種4T1細胞乳腺原位移植瘤最大，66c14細胞瘤體次之，4T07細胞瘤體最小；接種后35 d，三株細胞乳腺原位移植瘤大小較一致。4T1和66c14原位移植瘤均可發生轉移，其中4T1細胞較66c14細胞轉移最為嚴重，而4T07細胞未見轉移。

該小動物模型飼養在清潔級動物中，微生物處于監控狀態，動物房有相應的保護措施，小鼠不會出現逃逸，不會對外界環境造成影響。

本模型將luc基因轉染到小鼠乳腺癌細胞4TO7中得到了高表達luciferase細胞株。將luc標記的小鼠乳腺癌細胞4TO7細胞經原位接種至BALB／C小鼠，用活體熒光成像系統連續觀察28天，每7天觀察一次。第7天能夠發現成瘤，并且腫瘤的體積與發光強度隨時間變大、增強。

此模型與常規模型相比具有以下優點：（1）無創傷性；（2）可多次重復在不同時間點檢測；（3）快速掃描成像(時間<5 min)；（4）可以使實驗動物整體成像；（5）同一實驗動物體內獲得全部時間點的整體數據。

1. 細胞：小鼠乳腺癌細胞4TO7來自ATCC；載體：構建chicken β-actin-luc-NEO載體。CAG啟動子由巨細胞病毒（thecytomegalovirus，CMV)早期增強子（earlyenhancer element）和雞β-肌動蛋白（ chickenbeta-actin ）啟動子組成，用于驅動基因在哺乳動物載體的高水平表達。

2. 細胞穩定轉染：采用脂質體2000轉染小鼠乳腺癌細胞4TO7細胞，轉染后24 h，用含有G418的培養液篩選細胞三周，獲得穩定表達luciferase的細胞株，選擇其中高表達的克隆株擴大培養。

3. 腫瘤細胞的植入及活體熒光成像：收集處于生長對數期的轉染細胞，稀釋至5×106／mL。取0.1 mL細胞懸液接種于BALB／c小鼠（5周齡，體重15-18 g）右側第二對乳腺脂肪墊內。1×106個細胞/只，接種后每隔一周，采用活體熒光影像系統攝像動態觀察腫瘤的生長和轉移情況。觀察前每只小鼠腹腔注射熒光素底物(1.5 mg/10 g)，飽和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放人活體熒光影像系統攝像，Slide Book 4．0軟件進行分析。

女性乳腺是由皮膚、纖維組織、乳腺腺體和脂肪組成的，乳腺癌（breast cancer）是發生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤。乳腺癌中99%發生在女性，男性僅占1%。乳腺并不是維持人體生命活動的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌細胞喪失了正常細胞的特性，細胞之間連接松散，容易脫落。癌細胞一旦脫落，游離的癌細胞可以隨血液或淋巴液播散全身，形成轉移，危及生命。目前乳腺癌已成為威脅女性身心健康的常見腫瘤。

早期乳腺癌往往不具備典型的癥狀和體征，不易引起重視，常通過體檢或乳腺癌篩查發現。乳腺腫塊、乳頭溢液、皮膚改變、乳頭、乳暈異常、腋窩淋巴結腫等為乳腺癌的典型體征。

4TO7小鼠乳腺癌細胞，和4T1，66c14細胞同來源于一BALB／cfC3H小鼠自發乳腺癌細胞株，但4TO7細胞具有高致瘤性，但自發轉移率低。

細胞接種動物為BALB/c小鼠，BALB/c 是白色變種實驗室用鼠，起源于小家鼠Mus musculus，廣泛用于免疫學、生理學的動物實驗。