微生物實驗室標準化操作規程?無菌醫療器械注冊之微生物檢驗注意事項?健明迪

一、目的：

本規程旨在為微生物實驗室操作提供一個規范化規程；

二、適用范圍：

微生物實驗室；

三、責任人：

實驗室、微生物檢測員；

四、平安留意事項：

嚴厲遵照無菌操作，防止微生物污染;操作人員進入微生物實驗室應先關掉紫外燈。

五、微生物實驗室規范化操作規程：

1.微生物實驗室應設有無菌操作間緩和沖間，無菌操作間潔凈度應到達10000級，室內溫度堅持在20-24℃，濕度堅持在45-60%，超凈臺潔凈度應到達100級。

2.微生物實驗室應堅持清潔，嚴禁堆放雜物，以防污染。

3.嚴防一切滅菌器材和培育基污染，已污染者應中止運用。

4.微生物實驗室應備有任務濃度的消毒液(75％的酒精)。

5.微生物實驗室應活期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證微生物實驗室的潔凈度契合要求。

6.需求帶入微生物實驗室運用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應包扎嚴密，并應經過適宜的方法滅菌。

7.任務人員進入微生物實驗室前，必需用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間改換公用任務服，鞋，帽子，口罩和手套(用75%的乙醇再次擦拭雙手)，方可進入微生物實驗室停止操作。

8.微生物實驗室運用前必需翻開微生物實驗室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上，并且同時翻開超凈臺停止吹風。操作終了，應及時清算微生物實驗室，再用紫外燈輻照滅菌30分鐘。

9.供試品在反省前，應堅持外包裝完整，不得開啟，以防污染。反省前，用75%的酒精棉球消毒外表面。

10.每次操作進程中，均應做空白對照，以反省無菌操作的牢靠性。

11.吸取菌液時，必需用吸耳球吸取，切勿直接用口接觸吸管。

12.接種針每次運用前后，必需經過火焰灼燒滅菌，待冷卻后，方可接種培育物。

13.帶有菌液的吸管，試管，培育皿于高壓蒸汽滅菌鍋121℃堅持20min后取出清洗。

14.如有菌液灑在桌上或地上，應立刻用75%酒精溶液覆在被污染處至少30分鐘，再做處置。任務衣帽等遭到菌液污染時，應立刻脫去，高壓蒸汽滅菌后洗濯。

15.凡帶有活菌的物品，必需經消毒后，才干在水龍頭下沖洗，嚴禁污染下水道。

16.微生物實驗室應每月反省菌落數。在超凈任務臺開啟的形狀下，取內徑90mm的無菌培育皿若干，無菌操作區分注入消融并冷卻至約45℃的營養瓊脂培育基約15mL，放至凝結后，倒置于30-35℃培育箱培育48小時，證明無菌后，取平板3-5個，區分放置任務位置的左中右等處，開蓋表露30分鐘后，倒置于30-35℃培育箱培育48小時，取出反省。100級潔凈區平板雜菌數平均不得超越1個菌落，10000級潔凈室平均不得超越3個菌落。如超越限制，應對微生物實驗室停止徹底消毒，直至重復反省契合要求為止。

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來源：小桔燈網

作者：quite

病原微生物是指可以侵犯人體，惹起感染甚至傳染病的微生物，或稱病原體。病原體中，以細菌和病毒的危害性*。

感染是招致人類發病和死亡的主要緣由之一，20世紀早期，抗菌藥物的發現改動了現代醫學，讓人類有了對立感染的“武器”，也使得外科手術、器官移植和治療癌癥成為能夠。但是，惹起感染性疾病的病原體種類十分多，包括病毒、細菌、真菌和其他微生物，為了提高各種疾病診斷、治療效果，保證人們身體安康，就要求臨床檢驗技術愈加準確、快速。那么微生物檢測技術有哪些呢？

傳統檢測方式

對病原微生物停止傳統檢測的進程中，大都需求停止染色、培育，并在此基礎上停止生物鑒定，以便可以鑒別不同種類的微生物，檢測價值較高。傳統檢測方式主要包括涂片鏡檢、分別培育與生化反響、組織細胞培育三種。

1 涂片鏡檢

病原微生物體形體積龐大，大多無色半透明狀，將其染色后可借助顯微鏡觀察其大小、形狀、陳列等。直接涂片染色鏡檢簡便快速，對那些具有特殊形狀的病原微生物感染依然適用，例如淋球菌感染、結核分枝桿菌、螺旋體感染等的早期初步診斷。直接停止圖片鏡檢的方式反省速度較快，可以關于形狀特殊的病原體停止直觀的反省，不需求特殊的儀器和設備，在基層實驗室里依然是十分重要的病原微生物檢測手腕。

相關指南共識

《細菌與真菌涂片鏡檢和培育結果報告規范專家共識》

來源：中華檢驗醫學雜志2017年1月第40卷第1期

DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2017.01.006

2 分別培育與生化反響

分別培育主要用于存在多種細菌時需求將其中一種細菌分別的狀況，多用于痰液、糞便、血液、體液等，由于細菌生長和繁衍的時間比擬長，所以該檢驗方法需求一定的時間，且不可批量處置，所以醫學范圍不時對此停止了研討，采用了自動化的培育和鑒定的器械，對傳統的培育方式停止了改善，提升了檢測的準確性。

3 組織細胞培育

組織細胞主要包括衣原體、病毒和立克次體等，由于不同的病原體內的組織細胞種類不同，所以從病原微生物中活體取出組織細后需采用傳代培育的方式停止活細胞的培育，進而再講培育的病原微生物接種到組織細胞中停止培育，以盡能夠的增加細胞的病變。此外，也可以在培育組織細胞的進程中，可以將病原微生物直接在敏打植物體內接種，再依據植物的組織器官出現的改動對病原體的特質停止檢驗。

基因檢測技術

隨著我國醫療技術水平的不時提高，分子生物檢測技術開展提高，其可以有效地對病原微生物停止鑒定，還可以改善傳統檢測進程中運用外部形狀和生理特征停止檢測的現狀，可以采用特有的基因片段序列對病原微生物的種類停止鑒別，所以基因檢測技術以其自身獨到的優勢被臨床醫學檢驗范圍普遍運用。

1 聚合酶鏈反響（PCR）

聚合酶鏈反響(PolymeraseChainReaction，PCR)是一種在體外是用已知寡核苷酸引物引導未知片段中微量待測基因片段并停止擴增的技術。由于PCR可以看待測基因停止擴增，特別適用于病原體感染早期的診斷，但是假設引物特異性不強，能夠會形成假陽性的出現。PCR技術在近20年里開展迅速，從基因擴增到基因的克隆和改造以及遺傳剖析，牢靠性逐漸提高。該方法也是本次疫情新冠病毒的主要檢測方法。

2 基因芯片技術

基因芯片(Gene chip)技術是指經過微陣列(Microarray)技術將高密度DNA片段經過高速機器人或原位分解方式以一定的順序或陳列方式使其附著在如膜、玻璃片等固相外表，以同位素或熒光標志的DNA探針，借助堿基互補雜交原理，停止少量的基因表達及監測等方面研討的技術。將基因芯片技術運用到病原微生物的診斷中，可清楚延長診斷時間，同時還能檢驗出病原體能否存在耐藥性，以及對哪些藥物耐藥，對哪些藥物敏感等，從而為臨床用藥提供參考。但是該項技術的制形本錢較高，芯片檢測的敏理性也需提高，所以該項技術還主要用于實驗室研討，未能在臨床中失掉普遍運用。

3 核酸雜交技術

核酸雜交是病原微生物中具有互補序列的核苷酸單鏈在細胞內融合構成異質雙鏈的進程，導至發作雜交的要素是核酸與探針發作化學反響，從而對病原微生物停止鑒定。目前用于對病原微生物停止檢測的核酸再交技術主要有核酸原位雜交和膜上印跡雜交。核酸原位雜交是指病原體細胞中的核酸與標志探針停止雜交。膜上印跡雜交是指實驗人員將病原體細胞的核酸分別出后，將其停止純化后與固相支持物相結合，然后與核酸探針停止雜交。核酸雜交技術具有操作方便、快速的優點，而且適用于敏感、特異的病原微生物。

代表企業及其產品（有證）

相關指南共識

中國宏基因組學第二代測序技術檢測感染病原體的臨床運用專家共識

來源中華傳染病雜志, 2020,38(11) : 681-689. DOI:10.3760/cma.j.cn311365-20200731-00732

共識有兩種引薦建議：

引薦意見1：若疑心細菌、真菌、DNA病毒、寄生蟲、不典型病原體感染且需停止二代測序檢測時，建議采用DNA檢測；若疑心RNA病毒感染時，則建議采用RNA檢測。

引薦意見2：關于臨床疑似感染的病重、病危或免疫抑制、免疫缺陷患者，建議在完善傳統實驗室及分子生物學檢測的同時，采集疑似感染部位的標本停止二代測序。

高通量宏基因組測序技術檢測病原微生物的臨床運用規范化專家共識

來源中華檢驗醫學雜志, 2020,43(12) : 1181-1195. DOI: 10.3760/cma.j.cn114452-20200903-00704

血清學檢測

采用血清學檢測可以對病原微生物停止快速鑒定，血清學檢測技術的基本原理是經過已知的病原體抗原以及抗體對病原體停止檢測，與傳統的細胞分別培育相比，血清學檢驗的操作步驟復雜，其常用的檢測方法包括乳膠凝集實驗和酶聯免疫測試技術等。酶聯免疫測試技術的運用可以大幅度提高血清學檢測的敏理性和特殊性，不只可以對檢測樣本中的抗原停止檢測，還可以檢測抗體成分。

2020年9月，美國感染病學會（IDSA）發布了COVID-19的診斷之血清學檢測指南。

感興味的小同伴可以自行查閱，這里就不再詳細引見。

免疫學檢測

免疫學檢測又被稱為免疫磁珠分別技術，該技術可以將病原體中的致病菌和非致病菌分分開，其基本原理為：應用磁珠微球將特定病原體的單一抗原或許多種抗原集合在一同，經過抗原體反響和外部磁場的作用，將致病菌從病原體中分別出來，目前我國曾經研制出了多種具有針對性的免疫磁珠，例如有針對李斯特菌、大腸埃希氏菌和白色念珠菌等細菌的免疫磁珠，并且普遍運用于各級迷信研討室

以及實驗室。同時，采用經免疫磁珠分別技術對病原微生物停止檢測所需求的時間段，例如，采用免疫磁珠分別技術分別出的白色念珠菌可以直接運用顯微鏡停止檢測，可以有效延長 4 h 的檢測時間。此外，免疫磁珠分別技術還可以與其他檢測技術結合檢測病原微生物。

病原體檢測熱點——呼吸道病原體檢測

國際呼吸道病原體檢測的熱度逐漸升溫，主要緣由為國際疫情迸發初期流感樣癥狀患者混入新冠感染者，很難經過臨床癥狀予以區分，所以事先發布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第八版）》就指出：新型冠狀病毒肺炎主要與流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒等其他已知病毒性肺炎及肺炎支原體感染鑒別，尤其是對疑似病例要盡能夠采取包括快速抗原檢測和多重PCR核酸檢測等方法，對罕見呼吸道病原體停止檢測。也因此，國際外的一些企業末尾減速布局，搶占風口。NMPA對相關試劑盒的同意也是創下新高，所以，這里小編給大家引見下疫情迸發之初到目前獲NMPA同意的主要試劑盒及其企業信息（如需補充其他產品信息，請在留言區留言）：

援用：

[1] 云云, 汪長中, 吳璇. 病原微生物檢測技術停頓[J]. 安徽醫藥, 2013, 17(003):501-503.

[2] 王洪. 怎樣看待如今的病原微生物臨床檢驗技術?.

[3] 佚名. 細菌與真菌涂片鏡檢和培育結果報告規范專家共識[J]. 中華檢驗醫學雜志, 2017, 40(001):17-30.

[4] 《中華傳染病雜志》編輯委員會. 中國宏基因組學第二代測序技術檢測感染病原體的臨床運用專家共識[本文附更正][J]. 中華傳染病雜志, 2020, 38(11):681-689.

[5] [1] Hanson K E , Caliendo A M , Arias C A , et al. Infectious Diseases Society of America Guidelines on the Diagnosis of COVID-19:Serologic Testing[J]. Clinical Infectious Diseases, 2020.