微生物實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程?無(wú)菌醫(yī)療器械注冊(cè)之微生物檢驗(yàn)注意事項(xiàng)?健明迪

一、目的：

本規(guī)程旨在為微生物實(shí)驗(yàn)室操作提供一個(gè)規(guī)范化規(guī)程；

二、適用范圍：

微生物實(shí)驗(yàn)室；

三、責(zé)任人：

實(shí)驗(yàn)室、微生物檢測(cè)員；

四、平安留意事項(xiàng)：

嚴(yán)厲遵照無(wú)菌操作，防止微生物污染;操作人員進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)先關(guān)掉紫外燈。

五、微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化操作規(guī)程：

1.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)有無(wú)菌操作間緩和沖間，無(wú)菌操作間潔凈度應(yīng)到達(dá)10000級(jí)，室內(nèi)溫度堅(jiān)持在20-24℃，濕度堅(jiān)持在45-60%，超凈臺(tái)潔凈度應(yīng)到達(dá)100級(jí)。

2.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)堅(jiān)持清潔，嚴(yán)禁堆放雜物，以防污染。

3.嚴(yán)防一切滅菌器材和培育基污染，已污染者應(yīng)中止運(yùn)用。

4.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)備有任務(wù)濃度的消毒液(75％的酒精)。

5.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)活期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證微生物實(shí)驗(yàn)室的潔凈度契合要求。

6.需求帶入微生物實(shí)驗(yàn)室運(yùn)用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應(yīng)包扎嚴(yán)密，并應(yīng)經(jīng)過(guò)適宜的方法滅菌。

7.任務(wù)人員進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室前，必需用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間改換公用任務(wù)服，鞋，帽子，口罩和手套(用75%的乙醇再次擦拭雙手)，方可進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室停止操作。

8.微生物實(shí)驗(yàn)室運(yùn)用前必需翻開(kāi)微生物實(shí)驗(yàn)室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上，并且同時(shí)翻開(kāi)超凈臺(tái)停止吹風(fēng)。操作終了，應(yīng)及時(shí)清算微生物實(shí)驗(yàn)室，再用紫外燈輻照滅菌30分鐘。

9.供試品在反省前，應(yīng)堅(jiān)持外包裝完整，不得開(kāi)啟，以防污染。反省前，用75%的酒精棉球消毒外表面。

10.每次操作進(jìn)程中，均應(yīng)做空白對(duì)照，以反省無(wú)菌操作的牢靠性。

11.吸取菌液時(shí)，必需用吸耳球吸取，切勿直接用口接觸吸管。

12.接種針每次運(yùn)用前后，必需經(jīng)過(guò)火焰灼燒滅菌，待冷卻后，方可接種培育物。

13.帶有菌液的吸管，試管，培育皿于高壓蒸汽滅菌鍋121℃堅(jiān)持20min后取出清洗。

14.如有菌液灑在桌上或地上，應(yīng)立刻用75%酒精溶液覆在被污染處至少30分鐘，再做處置。任務(wù)衣帽等遭到菌液污染時(shí)，應(yīng)立刻脫去，高壓蒸汽滅菌后洗濯。

15.凡帶有活菌的物品，必需經(jīng)消毒后，才干在水龍頭下沖洗，嚴(yán)禁污染下水道。

16.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)每月反省菌落數(shù)。在超凈任務(wù)臺(tái)開(kāi)啟的形狀下，取內(nèi)徑90mm的無(wú)菌培育皿若干，無(wú)菌操作區(qū)分注入消融并冷卻至約45℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培育基約15mL，放至凝結(jié)后，倒置于30-35℃培育箱培育48小時(shí)，證明無(wú)菌后，取平板3-5個(gè)，區(qū)分放置任務(wù)位置的左中右等處，開(kāi)蓋表露30分鐘后，倒置于30-35℃培育箱培育48小時(shí)，取出反省。100級(jí)潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超越1個(gè)菌落，10000級(jí)潔凈室平均不得超越3個(gè)菌落。如超越限制，應(yīng)對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室停止徹底消毒，直至重復(fù)反省契合要求為止。

如需了解2020年藥品 微生物、潔凈間、實(shí)驗(yàn)室、計(jì)算機(jī)、數(shù)據(jù)完整性、注冊(cè)等

器械 無(wú)菌檢驗(yàn)員、內(nèi)審、滅菌、廠房驗(yàn)證、管代、法規(guī)等課程和內(nèi)訓(xùn)均可聯(lián)絡(luò)。

來(lái)源：小桔燈網(wǎng)

作者：quite

病原微生物是指可以侵犯人體，惹起感染甚至傳染病的微生物，或稱(chēng)病原體。病原體中，以細(xì)菌和病毒的危害性*。

感染是招致人類(lèi)發(fā)病和死亡的主要緣由之一，20世紀(jì)早期，抗菌藥物的發(fā)現(xiàn)改動(dòng)了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，讓人類(lèi)有了對(duì)立感染的“武器”，也使得外科手術(shù)、器官移植和治療癌癥成為能夠。但是，惹起感染性疾病的病原體種類(lèi)十分多，包括病毒、細(xì)菌、真菌和其他微生物，為了提高各種疾病診斷、治療效果，保證人們身體安康，就要求臨床檢驗(yàn)技術(shù)愈加準(zhǔn)確、快速。那么微生物檢測(cè)技術(shù)有哪些呢？

傳統(tǒng)檢測(cè)方式

對(duì)病原微生物停止傳統(tǒng)檢測(cè)的進(jìn)程中，大都需求停止染色、培育，并在此基礎(chǔ)上停止生物鑒定，以便可以鑒別不同種類(lèi)的微生物，檢測(cè)價(jià)值較高。傳統(tǒng)檢測(cè)方式主要包括涂片鏡檢、分別培育與生化反響、組織細(xì)胞培育三種。

1 涂片鏡檢

病原微生物體形體積龐大，大多無(wú)色半透明狀，將其染色后可借助顯微鏡觀察其大小、形狀、陳列等。直接涂片染色鏡檢簡(jiǎn)便快速，對(duì)那些具有特殊形狀的病原微生物感染依然適用，例如淋球菌感染、結(jié)核分枝桿菌、螺旋體感染等的早期初步診斷。直接停止圖片鏡檢的方式反省速度較快，可以關(guān)于形狀特殊的病原體停止直觀的反省，不需求特殊的儀器和設(shè)備，在基層實(shí)驗(yàn)室里依然是十分重要的病原微生物檢測(cè)手腕。

相關(guān)指南共識(shí)

《細(xì)菌與真菌涂片鏡檢和培育結(jié)果報(bào)告規(guī)范專(zhuān)家共識(shí)》

來(lái)源：中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志2017年1月第40卷第1期

DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2017.01.006

2 分別培育與生化反響

分別培育主要用于存在多種細(xì)菌時(shí)需求將其中一種細(xì)菌分別的狀況，多用于痰液、糞便、血液、體液等，由于細(xì)菌生長(zhǎng)和繁衍的時(shí)間比擬長(zhǎng)，所以該檢驗(yàn)方法需求一定的時(shí)間，且不可批量處置，所以醫(yī)學(xué)范圍不時(shí)對(duì)此停止了研討，采用了自動(dòng)化的培育和鑒定的器械，對(duì)傳統(tǒng)的培育方式停止了改善，提升了檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

3 組織細(xì)胞培育

組織細(xì)胞主要包括衣原體、病毒和立克次體等，由于不同的病原體內(nèi)的組織細(xì)胞種類(lèi)不同，所以從病原微生物中活體取出組織細(xì)后需采用傳代培育的方式停止活細(xì)胞的培育，進(jìn)而再講培育的病原微生物接種到組織細(xì)胞中停止培育，以盡能夠的增加細(xì)胞的病變。此外，也可以在培育組織細(xì)胞的進(jìn)程中，可以將病原微生物直接在敏打植物體內(nèi)接種，再依據(jù)植物的組織器官出現(xiàn)的改動(dòng)對(duì)病原體的特質(zhì)停止檢驗(yàn)。

基因檢測(cè)技術(shù)

隨著我國(guó)醫(yī)療技術(shù)水平的不時(shí)提高，分子生物檢測(cè)技術(shù)開(kāi)展提高，其可以有效地對(duì)病原微生物停止鑒定，還可以改善傳統(tǒng)檢測(cè)進(jìn)程中運(yùn)用外部形狀和生理特征停止檢測(cè)的現(xiàn)狀，可以采用特有的基因片段序列對(duì)病原微生物的種類(lèi)停止鑒別，所以基因檢測(cè)技術(shù)以其自身獨(dú)到的優(yōu)勢(shì)被臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)范圍普遍運(yùn)用。

1 聚合酶鏈反響（PCR）

聚合酶鏈反響(PolymeraseChainReaction，PCR)是一種在體外是用已知寡核苷酸引物引導(dǎo)未知片段中微量待測(cè)基因片段并停止擴(kuò)增的技術(shù)。由于PCR可以看待測(cè)基因停止擴(kuò)增，特別適用于病原體感染早期的診斷，但是假設(shè)引物特異性不強(qiáng)，能夠會(huì)形成假陽(yáng)性的出現(xiàn)。PCR技術(shù)在近20年里開(kāi)展迅速，從基因擴(kuò)增到基因的克隆和改造以及遺傳剖析，牢靠性逐漸提高。該方法也是本次疫情新冠病毒的主要檢測(cè)方法。

2 基因芯片技術(shù)

基因芯片(Gene chip)技術(shù)是指經(jīng)過(guò)微陣列(Microarray)技術(shù)將高密度DNA片段經(jīng)過(guò)高速機(jī)器人或原位分解方式以一定的順序或陳列方式使其附著在如膜、玻璃片等固相外表，以同位素或熒光標(biāo)志的DNA探針，借助堿基互補(bǔ)雜交原理，停止少量的基因表達(dá)及監(jiān)測(cè)等方面研討的技術(shù)。將基因芯片技術(shù)運(yùn)用到病原微生物的診斷中，可清楚延長(zhǎng)診斷時(shí)間，同時(shí)還能檢驗(yàn)出病原體能否存在耐藥性，以及對(duì)哪些藥物耐藥，對(duì)哪些藥物敏感等，從而為臨床用藥提供參考。但是該項(xiàng)技術(shù)的制形本錢(qián)較高，芯片檢測(cè)的敏理性也需提高，所以該項(xiàng)技術(shù)還主要用于實(shí)驗(yàn)室研討，未能在臨床中失掉普遍運(yùn)用。

3 核酸雜交技術(shù)

核酸雜交是病原微生物中具有互補(bǔ)序列的核苷酸單鏈在細(xì)胞內(nèi)融合構(gòu)成異質(zhì)雙鏈的進(jìn)程，導(dǎo)至發(fā)作雜交的要素是核酸與探針發(fā)作化學(xué)反響，從而對(duì)病原微生物停止鑒定。目前用于對(duì)病原微生物停止檢測(cè)的核酸再交技術(shù)主要有核酸原位雜交和膜上印跡雜交。核酸原位雜交是指病原體細(xì)胞中的核酸與標(biāo)志探針停止雜交。膜上印跡雜交是指實(shí)驗(yàn)人員將病原體細(xì)胞的核酸分別出后，將其停止純化后與固相支持物相結(jié)合，然后與核酸探針停止雜交。核酸雜交技術(shù)具有操作方便、快速的優(yōu)點(diǎn)，而且適用于敏感、特異的病原微生物。

代表企業(yè)及其產(chǎn)品（有證）

相關(guān)指南共識(shí)

中國(guó)宏基因組學(xué)第二代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)感染病原體的臨床運(yùn)用專(zhuān)家共識(shí)

來(lái)源中華傳染病雜志, 2020,38(11) : 681-689. DOI:10.3760/cma.j.cn311365-20200731-00732

共識(shí)有兩種引薦建議：

引薦意見(jiàn)1：若疑心細(xì)菌、真菌、DNA病毒、寄生蟲(chóng)、不典型病原體感染且需停止二代測(cè)序檢測(cè)時(shí)，建議采用DNA檢測(cè)；若疑心RNA病毒感染時(shí)，則建議采用RNA檢測(cè)。

引薦意見(jiàn)2：關(guān)于臨床疑似感染的病重、病危或免疫抑制、免疫缺陷患者，建議在完善傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室及分子生物學(xué)檢測(cè)的同時(shí)，采集疑似感染部位的標(biāo)本停止二代測(cè)序。

高通量宏基因組測(cè)序技術(shù)檢測(cè)病原微生物的臨床運(yùn)用規(guī)范化專(zhuān)家共識(shí)

來(lái)源中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2020,43(12) : 1181-1195. DOI: 10.3760/cma.j.cn114452-20200903-00704

血清學(xué)檢測(cè)

采用血清學(xué)檢測(cè)可以對(duì)病原微生物停止快速鑒定，血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理是經(jīng)過(guò)已知的病原體抗原以及抗體對(duì)病原體停止檢測(cè)，與傳統(tǒng)的細(xì)胞分別培育相比，血清學(xué)檢驗(yàn)的操作步驟復(fù)雜，其常用的檢測(cè)方法包括乳膠凝集實(shí)驗(yàn)和酶聯(lián)免疫測(cè)試技術(shù)等。酶聯(lián)免疫測(cè)試技術(shù)的運(yùn)用可以大幅度提高血清學(xué)檢測(cè)的敏理性和特殊性，不只可以對(duì)檢測(cè)樣本中的抗原停止檢測(cè)，還可以檢測(cè)抗體成分。

2020年9月，美國(guó)感染病學(xué)會(huì)（IDSA）發(fā)布了COVID-19的診斷之血清學(xué)檢測(cè)指南。

感興味的小同伴可以自行查閱，這里就不再詳細(xì)引見(jiàn)。

免疫學(xué)檢測(cè)

免疫學(xué)檢測(cè)又被稱(chēng)為免疫磁珠分別技術(shù)，該技術(shù)可以將病原體中的致病菌和非致病菌分分開(kāi)，其基本原理為：應(yīng)用磁珠微球?qū)⑻囟ú≡w的單一抗原或許多種抗原集合在一同，經(jīng)過(guò)抗原體反響和外部磁場(chǎng)的作用，將致病菌從病原體中分別出來(lái)，目前我國(guó)曾經(jīng)研制出了多種具有針對(duì)性的免疫磁珠，例如有針對(duì)李斯特菌、大腸埃希氏菌和白色念珠菌等細(xì)菌的免疫磁珠，并且普遍運(yùn)用于各級(jí)迷信研討室

以及實(shí)驗(yàn)室。同時(shí)，采用經(jīng)免疫磁珠分別技術(shù)對(duì)病原微生物停止檢測(cè)所需求的時(shí)間段，例如，采用免疫磁珠分別技術(shù)分別出的白色念珠菌可以直接運(yùn)用顯微鏡停止檢測(cè)，可以有效延長(zhǎng) 4 h 的檢測(cè)時(shí)間。此外，免疫磁珠分別技術(shù)還可以與其他檢測(cè)技術(shù)結(jié)合檢測(cè)病原微生物。

病原體檢測(cè)熱點(diǎn)——呼吸道病原體檢測(cè)

國(guó)際呼吸道病原體檢測(cè)的熱度逐漸升溫，主要緣由為國(guó)際疫情迸發(fā)初期流感樣癥狀患者混入新冠感染者，很難經(jīng)過(guò)臨床癥狀予以區(qū)分，所以事先發(fā)布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第八版）》就指出：新型冠狀病毒肺炎主要與流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒等其他已知病毒性肺炎及肺炎支原體感染鑒別，尤其是對(duì)疑似病例要盡能夠采取包括快速抗原檢測(cè)和多重PCR核酸檢測(cè)等方法，對(duì)罕見(jiàn)呼吸道病原體停止檢測(cè)。也因此，國(guó)際外的一些企業(yè)末尾減速布局，搶占風(fēng)口。NMPA對(duì)相關(guān)試劑盒的同意也是創(chuàng)下新高，所以，這里小編給大家引見(jiàn)下疫情迸發(fā)之初到目前獲NMPA同意的主要試劑盒及其企業(yè)信息（如需補(bǔ)充其他產(chǎn)品信息，請(qǐng)?jiān)诹粞詤^(qū)留言）：

援用：

[1] 云云, 汪長(zhǎng)中, 吳璇. 病原微生物檢測(cè)技術(shù)停頓[J]. 安徽醫(yī)藥, 2013, 17(003):501-503.

[2] 王洪. 怎樣看待如今的病原微生物臨床檢驗(yàn)技術(shù)?.

[3] 佚名. 細(xì)菌與真菌涂片鏡檢和培育結(jié)果報(bào)告規(guī)范專(zhuān)家共識(shí)[J]. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2017, 40(001):17-30.

[4] 《中華傳染病雜志》編輯委員會(huì). 中國(guó)宏基因組學(xué)第二代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)感染病原體的臨床運(yùn)用專(zhuān)家共識(shí)[本文附更正][J]. 中華傳染病雜志, 2020, 38(11):681-689.

[5] [1] Hanson K E , Caliendo A M , Arias C A , et al. Infectious Diseases Society of America Guidelines on the Diagnosis of COVID-19:Serologic Testing[J]. Clinical Infectious Diseases, 2020.